Welker Lab

prime editor activity reporter (PEAR)

A prime editing egy CRISPR/Cas9 alapú génszerkesztési eljárás, amely lehetővé teszi rövid inszerciók, deléciók és szubsztitúciók bevitelét a genomba. A prime editor activity reportert (PEAR) egy plazmid-alapú, érzékeny, fluoreszcens riporter rendszer, amely a prime editorok akitivitásának tesztelésére és összehasonlítására szolgál. A PEAR riporter rendszer előnye, hogy a genomi kontextustól függetlenül vizsgálható benne az editálási hatékonyság.

A prime editor activity reporter (PEAR) rendszer elve. (A) A PEAR vázlata. A PEAR mechanizmusa ugyanazon a koncepción alapul, mint a BEAR, és ugyanazt az inaktív splice-helyet tartalmazza. (B) A PEAR-GFP plazmidon a PBS, az RT és a komplementer DNS-szál nickelésének optimalizálása. (C, D) Aktív (pozitív kontroll) vagy inaktív PEAR plazmiddal transzfektált HEK293T sejtek áramlási citometriás mérései, vagy a negatív kontrollnak megfelelő nCas9 mellett, vagy PE2 vektorokkal (fekete, szürke, illetve zöld oszlopok).

Referencia
Simon, Dorottya Anna ; Tálas, András ; Kulcsár, Péter István ; Biczók, Zsuzsanna ; Krausz, Sarah Laura ; Várady, György ; Welker, Ervin
PEAR, a flexible fluorescent reporter for the identification and enrichment of successfully prime edited cells
ELIFE 11 Paper: e69504 , 19 p. (2022)

Publikáció megtekintése